操作流程：
(1)產(chǎn)品僅用于科研待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl，每種樣品設(shè)3個(gè)平行孔；設(shè)兩個(gè)陰性對(duì)照孔，每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl；另設(shè)一個(gè)空白對(duì)照孔，加入純細(xì)胞裂解液100μl。
(2)酶標(biāo)板置4℃，包被過夜。
(3)洗板：吸干孔內(nèi)反應(yīng)液，用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后，即甩去)，之后將洗滌液注滿板孔，浸泡1-2分鐘，間歇搖動(dòng)。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。
(4)陰性對(duì)照孔每孔加入PBS 50μl，樣品孔及空白孔每孔加入1：500稀釋的工作液50μl。
(5)酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。
(6)洗板，同(4)。
(7)每孔加1：5000稀釋的HRP-標(biāo)記的工作液100μl。
(8)酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。
(9)洗板，同(4)。
(10)每孔加TMB顯色液100μl，輕輕混勻10s，置37℃暗處反應(yīng)15-20min。
(11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。
(12)分別測450nm吸光值W1和630nm吸光值W2，最終測得的OD值為兩者之差(W1-W2)，以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
(13)數(shù)據(jù)處理：在得出標(biāo)本(S)和陰性對(duì)照(N)的OD值后，計(jì)算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標(biāo)準(zhǔn)。
大鼠鞘磷脂(SM)ELISA試劑盒的使用常識(shí)：
（1）試劑切忌與手接觸（有些試劑有強(qiáng)腐蝕性、等特性）。
（2）要用潔凈的藥勺，量筒或滴管取用試劑，絕不允許用同一種工具同時(shí)連續(xù)取用多種試劑。取完一種試劑后，應(yīng)將工具洗凈（藥勺要擦干）后，才可取用另一種試劑。
（3）試劑取用后一定要將瓶塞蓋緊，不可放錯(cuò)瓶蓋和滴管，絕不允許張冠李戴，用完后請(qǐng)及時(shí)將瓶放回原處，以免遺忘，帶來不便。
（4）已取出的試劑不能再放回原試劑瓶內(nèi)（怕產(chǎn)生原試劑的再次污染）。
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