雞Bcl2同源拮抗物(Bak)酶聯(lián)免疫分析
試劑試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用。
檢測范圍： 96T
0.2pg/ml-9pg/ml
使用目的：
本試劑盒用于測定雞血清、血漿及相關(guān)液體樣本中 Bcl2 同源拮抗物(Bak)含量。
實驗原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中雞 Bcl2 同源拮抗物(Bak)水平。用純化的雞 Bcl2
同源拮抗物(Bak)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入 Bcl2 同源
拮抗物(Bak)，再與 HRP 標記的 Bcl2 同源拮抗物(Bak)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標抗體
復(fù)合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物 TMB 顯色。 TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸
的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的 Bcl2 同源拮抗物(Bak)呈正相關(guān)。用酶
標儀在 450nm波長下測定吸光度（OD 值），通過標準曲線計算樣品中雞 Bcl2 同源拮抗物(Bak)
濃度。
試劑盒組成

1	30 倍濃縮洗滌液	20ml×1 瓶	7	終止液	6ml×1 瓶
2	酶標試劑	6ml×1 瓶	8	標準品（16pg/ml）	0.5ml×1 瓶
3	酶標包被板	12 孔×8 條	9	標準品稀釋液	1.5ml×1 瓶
4	樣品稀釋液	6ml×1 瓶	10	說明書	1 份
5	顯色劑 A 液	6ml×1 瓶	11	封板膜	2 張
6	顯色劑 B 液	6ml×1/瓶	12	密封袋	1 個

標本標本要求
1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能
馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2．不能檢測含 NaN3 的樣品，因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
操作步驟
1. 標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀
釋。

8pg/ml	5 號標準品	150μl 的原倍標準品加入 150μl 標準品稀釋液
4pg/ml	4 號標準品	150μl 的 5 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液
2pg/ml	3 號標準品	150μl 的 4 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液
1pg/ml	2 號標準品	150μl 的 3 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液
0.5pg/ml	1 號標準品	150μl 的 2 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液

2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、
待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣 50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl，
然后再加待測樣品 10μl（樣品最終稀釋度為 5 倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡
量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3. 溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。
4. 配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此
重復(fù) 5 次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標試劑 50μl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同 3。
8. 洗滌：操作同 5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl，再加入顯色劑 B50μl，輕輕震蕩混勻， 37℃避光顯色
15 分鐘.
10. 終止：每孔加終止液 50μl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。
11. 測定：以空白空調(diào)零， 450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。 測定應(yīng)在加終止
液后 15 分鐘以內(nèi)進行。
操作程序總結(jié)：
計算計算
以標準物的濃度為橫坐標， OD 值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的
OD 值由標準曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與 OD 值計算出標
準曲線的直線回歸方程式，將樣品的 OD 值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，
即為樣品的實際濃度。
注意事項
1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未
用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。
3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間最好
控制在 5 分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。
4． 請每次測定的同時做標準曲線，最好做復(fù)孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高（樣本 OD 值
大于標準品孔第一孔的 OD 值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n 倍）后再測定，計
算時請最后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。
5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物請避光保存。
7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9．本試劑不同批號組分不得混用。
10. 如與英文說明書有異，以英文說明書為準。
保存條件及有效期
1．試劑盒保存：； 2-8℃。

2．有效期： 6 個月

了解更多：USP標準品 http://www.shkit.net/prolist_T34.html

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